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DNA（液體基礎(chǔ)型）恒溫快速擴(kuò)增試劑盒

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聯(lián)系人：張經(jīng)理

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

（貨號(hào)：WLB5001）原理概述：本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板

詳細(xì)介紹

DNA（液體基礎(chǔ)型）恒溫快速擴(kuò)增試劑盒 （貨號(hào)：WLB5001）

原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板；在侵入位點(diǎn)形成D-loop區(qū)域，并開(kāi)始對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行掃描；待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后，復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時(shí)，聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端，開(kāi)始鏈的延伸。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需30 mins）等優(yōu)點(diǎn)。金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作，無(wú)需購(gòu)買(mǎi)PCR擴(kuò)增儀等價(jià)格高昂的設(shè)備。

引物設(shè)計(jì)：

建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在150-300 bp，通常不超過(guò)500 bp。

試劑盒組成：

組成 含量
C buffer 1mL×2管
L buffer 500 μL×1管
P-core 1.2 mL×1管
B buffer 300 μL×1管
使用說(shuō)明書(shū) 1份

試劑盒儲(chǔ)存：

運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸；

儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品有效期：6個(gè)月。

操作步驟：提前將試劑盒所需組分取出，冰上或低溫下融化（C buffer可室溫融化），震蕩混勻。

1) 向無(wú)菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer；

2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物；

3) 加入1.5μL dNTPs；

4) 向反應(yīng)管中加入12 μL P-core（步驟1~4可以混合后再分裝至反應(yīng)管中）；

5) 向反應(yīng)管中加入2.5μL ddH2O和2.5 μL核酸模板（可根據(jù)核酸濃度和實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整加入的核酸模板體積，并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為5 μL）；

6) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（加入B buffer反應(yīng)立即被啟動(dòng)）；上下顛倒混勻后（請(qǐng)務(wù)必保證充分混勻），將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中：37~42 oC恒溫孵育，時(shí)間30 mins；

7) 反應(yīng)結(jié)束后，如需進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，請(qǐng)加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反應(yīng)液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進(jìn)行電泳檢測(cè)。

體系配制

組分 體積（μL）
C buffer 20

5
L buffer
P-core 12
dNTPs(10 mM) 1.5
下游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
ddH2O和DNA模板 5
B buffer 2.5
總體積 50

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

N：陰性對(duì)照； P：正對(duì)照

注意事項(xiàng)：

  • 為保證液體試劑組分活性，請(qǐng)保證儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC；試劑使用時(shí)請(qǐng)保持低溫，避免高溫放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間；
  • 在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免微量核酸染，并盡量考慮設(shè)置空白對(duì)照以確認(rèn)是否有核酸污染。

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